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  • 為什么外源蛋白誘導表達量特別少?

    外源蛋白誘導表達量特別少,求大俠解惑

    本人研一,老板讓我做一個蛋白的抗體,首先得將該蛋白外源誘導表達出來
    我的目的基因大小是3600,目的蛋白大概130KD
    用的載體是HisB,大約4400bp
    酶連很順利,開始用的是大腸JM109進行表達,0.5M的IPTG,37度誘導6小時
    一跑膠發現有條帶可是特別細,做了幾次誘導效果都不怎么好
    不知道到底是什么原因?難道因為外源片段太大了載體承受不了?或者宿主菌不對?誘導的條件需要改進?
    求高人指點,不勝感激~~~

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    超過100KDa的蛋白不是很好表達,可以試試不同的宿主。
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    你換Top10做什么啊,這個是克隆宿主,不是表達宿主。。。
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    對啊,你應該用表達宿主BL21或其他
    而且我覺得還要看你用的是什么vector

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    我們這邊有人就是用TOP10做HISB的表達啊,而且效果很好呢
    剛用TOP10取的樣跑了個膠,效果跟JM109差不多,也很細
    轉了BL21的剛長上
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    對啊,你應該用表達宿主BL21或其他
    而且我覺得還要看你用的是什么vector
    呵呵,BL21轉了幾次了都不長的,今天終于長了,準備試一試
    載體是HISB,查了一下可以用JM109和BL21,不過也有很多人用TOP10的
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    LZ的蛋白可溶性高嗎?如果可溶性低的話純化的兩是很少的~

    暈死。怎么能用克隆宿主的哇。。。。
    要用表達宿主。

    我遇見很多這種同學了。。
    一定要配套好表達載體和宿主。。。
    額。。樓主好好學習下p ET系列的基本知識。

    LZ的蛋白可溶性高嗎?如果可溶性低的話純化的兩是很少的~
    我也想了這個問題,所以今天拿沉淀跑了個膠,還不知道結果
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    誘導溫度是不是太高了啊

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