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  • PCR的時候誤加了PBS有影響嗎?

    1、PCR的時候,本來是要加無菌水的,結果誤加了PBS,會不會有什么影響?會不會P不出來?
    2、提了幾個細菌的基因組之后,準備將其稀釋做PCR的模版,一般都是用的無菌水稀釋,如果我用的是PBS,并在-20℃保存備用。這樣處理之后,還能不能用來做后續的實驗(如PCR等)?

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    首先你這種情況還真沒碰到過。PBS和無酶水的區別是多了幾種離子,鉀離子,鈉離子,氯離子等等。但是我記得這些離子不會對體系中酶的活性產生影響,倒是在對產物跑膠的時候會產生影響。其次,PBS的PH好像是在7.3左右,不知在此PH下會不會對酶活性有影響?!PH的影響可能是主要的。Zui后,由于你用的PBS應該是普通的,不是無酶的,那么如果有雜質的話可能也會產生影響。事實上PBS中是有雜質的,因為根據經驗,我們配的PBS長期存放后會有沉淀。

    因為我沒遇到這種情況過,所以只能幫你分析,不能給你確定答案,個人建議樓主可以去嘗試做一下,看你做的結果之后再做決定


    我個人感覺普通的Taq酶對體系及成分要求并不是特別嚴謹 我7uL體系(本應該10uL的)P成功過 有人錯拿NaOH代替蒸餾水也P成功過
    但是高保真系列酶我就說不上了................
    如果你做錯了 對于PCR這種需要反復嘗試的實驗 先將錯就錯做下去 出了看結果再說 其實我們都曾心里自己安慰自己:“說不定結果更好了呢”

    ?

    其實這種情況,就p一下試試唄,如果p不出來再重新做唄,只是有一樣,有些離子的存在可能在一定程度上影響聚合酶的保真度,所以還是要謹慎

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