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  • 有沒有批量提取DNA的簡便方法?

    求大批量提取DNA的簡便方法,最近實驗室要對轉基因的材料進行pcr檢測,估計要提取數以千計的水稻葉片dna。實驗室一直用ctab法。因為只用于pcr檢測,dna的量和質量要求都不高,請問各位同學有沒有簡便快捷的提dna方法?

    提供一個方法,我最近一直用這個方法提取擬南芥DNA用于PCR,效果很好,方便快捷。見文獻
    A simple and rapid method for the preparation of plant genomic DNA for PCR analysis
    K.Edwards, C.Johnstone and C.Thompson
    Nucleic Acids Research, Vol. 19, No. 6 1349

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    實驗室提擬南芥DNA,EDARDS溶液簡易法用機器震蕩完成,如果熟練加努力,一個人一天能提好幾百個。

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    液氮提取啊,收率很高的,而且方便

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    應該是edwards,另外可以用葉片組織直接PCR的,可以自己摸索,也可以向公司購買。

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    我是小白來學習下~寫寫樓上的幫助

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    上面這位師兄的這篇文獻所敘述的方法被廣泛應用中,實際操作過程中,個人不建議在提取液中加入CTAB,那樣可能會導致DNA擴增不出來,具體什么原理,小妹暫時也還么有搞懂,但實踐證明不加CTAB,提取的水稻DNA效果很好。并且耗時很短。幾千個的話,快的話幾天就搞定了。。

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    請問能說說你的詳細步驟嗎?是不是和文獻上的完全一樣:
    用離心管切下葉片,然后用一次性的研磨棒磨碎,加入提取液,漩渦混勻5 s,室溫靜致1小時。13000 rpm離心1 min,取上清加入適量異丙醇沉淀核酸,13000 rpm離心5 min,干燥沉淀加水溶解。
    這兩周我在做race,導師單人匹馬用傳統的ctab法把幾千個樣都搞掂了....不過再過幾個月又要檢測晚造的植株了,還是想要試一試簡便的方法。
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    你們導師是一位很強悍的人啊,這點上,讓人佩服,作為學生的我們實在是感到汗顏。
    ? ???上面那位前輩的文獻我看了,其實有些步驟是不一樣的,比如說我們添加了一步酒精清洗DNA,這樣的DNA比不清洗的肯定要好。
    ? ???但是師兄不知道你提這個DNA干什么用的,有點必須說清楚,SDS法提取的是微量DNA,如果是做定位什么的,這個方法還是稍顯欠缺的。傳統CTAB法自然是有它的道理。
    ? ? 那么下面就說說一般我們是怎么做的吧。
    ? ? 首先磨碎加入提取液混勻,我們甚至沒有用到漩渦震蕩儀,靜置一段時間,具體我還真沒怎么記是多久,反正一個小時以內了,然后12000離心2min,吸取上清,加入異丙醇沉淀,靜置兩分鐘,適量混勻。12000離心5min,去除上清,加入75%酒精清洗,離心5min,去酒精,干燥沉淀,加入ddh2o溶解。


    我就是核酸提取后,PCR多態性擴增不出條帶(白板),是什么原因呢?用的引物是ISSR,材料是果樹類蓮霧葉片,體系沒有問題,是讓別人一塊的帶著混樣的,模板量是母液稀釋30倍后加2微升,提取步驟:CTAB法,酚-氯仿-異戊醇抽提10min,氯仿-異戊醇抽提10min, 異丙醇沉淀,TE溶解,RNA酶處理,氯仿-異戊醇抽提10min, 異丙醇沉淀;dd水溶解===這種情況是年后才出現的,以前的時候沒有問題,已經提取了好多次了,有的時候是剛提取后 就擴增條帶很好,然后不到一周就又不行了,搞不明白啊~~
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    十分感謝。我們提DNA只是為篩選轉基因的水稻植株,DNA的質量要求不高。
    另再問,你是用液氮磨碎樣品的嗎?用的提取液應該是和文獻的一樣的吧:200 mM Tris HCl pH 7.5, 250 mM NaCl, 25 mM EDTA, 0.5% SDS。

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    同學你的DNA質量如何呢?譬如說擴actin之類的正對照能擴出來么?
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    正對照是怎么跑的呢?DNA質量個人認為還行吧,方法是實驗室傳統方法,以前都沒問題,一直在找原因,頭都大了~·

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    師兄啊我倒是想幫你分析呀,但是我沒有實際用CTAB操作過,都是理論上的知識,小妹現在也就開始做實驗頂天三個月,積淀還差的遠,有心無力。
    ? ?? ?個人覺得吧實際做實驗的時候什么情況都能出現。還真說不出來個所以然。有幾次我更糾結呢,一個Indel引物第一次P出來了,后面四次一次都沒有P出來。模板,引物,PCR條件都試過了,這個到現在都不知道什么原因。
    ? ?? ?你說有時候剛提取出來的擴增條帶很好,不到一周就不行了,是不是DNA被降解了?一般來說DAN放在4度冰箱是可以保存兩個月的。小妹一般溶解DNA喜歡用Tris pH 8.0 10mM。要不然師兄你試試吧。。。

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    水稻的話是要而且動作一定要快,液氮的,不然葉片咋個弄的碎喲,提取液用1.5%SDS吧。感覺0.5%的話,稍微有點低。
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    請問一下師姐,要取多少的樣呢?可否用液氮磨碎后,再轉移到EP管,再加提取液?
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    首先答案是肯定的,這樣子弄可以的撒。
    但是為什么要這樣做呢?
    在液氮磨碎后轉移到EP管?你們用研缽磨碎的嗎?
    還是說你們的樣本很難于磨碎,必須使用這樣的方式才能磨碎。
    一般來說禾本科類的植物取樣本的量如水稻只需要3~5分之一葉片就足夠了,當然這個也是要根據你做的實驗的要求來的。
    個人覺得如果做水稻這類禾本科植物的話不需要這么麻煩,這樣既浪費液氮,樣本的取樣量要求也必較大,中間肯定有損失的撒。其他比如木本植物什么的話,可以試試
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    一般都是酚-氯仿抽提法

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    我提擬南芥用的!要求不高,PCR就好!
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    這個提出來,黑乎乎的一坨!明顯的不是DNA?。。‥DTANa2 代替了EDTA)
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    話說我也是做擬南芥的哇
    用這個方法簡單方便,很快的
    至于為什么會黑乎乎一坨我還真沒遇到過?關鍵是你還用的是坨?
    難道不是液體?你提出來是固態?????
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    不好意思上面這個說法有問題哈,按理來說溶解后的DNA應該是無色的吧?

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    用異丙醇沉淀后,去上清,就是黑乎乎的了!目測是蛋白,加70%乙醇洗2次~ddH2O溶不了!

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    這個要怎么說好呢
    SDS這個方法大家運用的都已經很熟悉了
    禾本科類的植物用這個方法都很快捷簡單
    現在來回答生理生態學的這位蟲友哈,因為沒有名字只能這么稱呼了
    至于我怎么提取的,具體方法請參照前面回帖,這里就不再說了
    提取液的配方請參照前面的用量,第一次吸取的上清液應該是無色或者綠色的。說是無色的是因為如果你取樣特別微量(擬南芥播種后大約20天左右的苗去其葉片)的話,可能是看不到什么東西的,但DNA是能提出來的。
    如果這步么有問題,那么加入異丙醇沉淀,在管底可能會看到白色的沉淀物的。為啥我又要說可能呢?完全是因為擬南芥這個東西基因組本來就小,樣本再一小,提取出來的量就可能肉眼不見咯。
    如果是水稻的話,可以看到很明顯的白色沉淀哈~~
    如果這樣子還在黑乎乎的話,就不知道怎么回事了。。。
    只能說求人品。。。。
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    請問你在析出DNA那一步,加入-20度無水乙醇后放在-20度冰箱中多久啊。放久了會不會對DNA有影響啊。
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    水稻直接丁丁點葉片,想辦法搗爛巴點,加NaOH95度煮煮數分鐘,加點酸中和,上清液就可以去做PCR了

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